שְׁאֵלָה:
איך מפרקים גושי תאים בעת מעבר?
Rob O'Callahan
2011-12-22 07:55:37 UTC
view on stackexchange narkive permalink

אני עובד עם תאי HepG2 והם מאוד אוהבים ליצור גושים. נראה כי צנרת מעלה ומטה ב- TrypLE אינה יעילה במיוחד בפירוקם.

רוב: האם גוגל יכולה לענות על שאלה זו? אם זה יכול, אנא חזור ופרסם תשובה לשאלתך. הנה רמז: http://hepg2.com/index.html
שְׁלוֹשָׁה תשובות:
#1
+5
Jeremy
2012-01-17 09:40:10 UTC
view on stackexchange narkive permalink

אני מוצא שאני מקבל גושים רק (עם HeLa וסוגי תאים דומים) אם אני משאיר אותם ב- Tryple יותר מדי זמן. באופן כללי אני משאיר אותם בטמפ 'החדר (לא חם) Tryple למשך 8 דקות, ואז אני מכוון את הכלי, מכסה, כדי שאוכל לראות את "הברק" של התאים על המנה (זה קורה כמובן במנדף. ). ואז אני פוצץ את הברק עם Tryple באמצעות פיפפר 1000 ליטר, שמדביק את התאים. אלה בדרך כלל הרבה פחות מגובשים מאשר אם אתן לטריפל לדבוק את התאים.

#2
+3
kasia
2012-01-15 19:52:12 UTC
view on stackexchange narkive permalink

בפרוטוקולים מסוימים להקמת תרבויות ראשוניות (למשל ממח העצם של העכבר או מאנדומטריום העכברוש), יש שלב הדורש דחיפת השעיית תאים דרך מחט גדולה כדי להיפטר מגושים. כמובן, זה טומן בחובו סיכון גבוה לפגוע בתאים, ולכן לפעמים משתמשים בקולגנאז במקום.

זה עשוי גם להיות מועיל לשטוף את התאים ב- PBS ללא יונים לפני המעבר ולהשתמש ב- tripsin עם EDTA. זה אמור להיפטר לפחות מסידן מהצלחת, כך שפעולתם של חלבוני ההדבקה תעוכב.

#3
+3
Valentinos
2012-02-17 21:28:23 UTC
view on stackexchange narkive permalink

גושי תאים שאינם מתנתקים עם פיפטינג קפדני עלולים מאוד להיגרם מ- DNA חופשי בהשעיית התא שלך (כלומר אם אתה עושה טריפסין יותר מדי זמן). DNA חופשי מושך אליו תאים הנקשרים לחלוטין ויוצרים גושים.

שתי דרכים אפשריות להיפטר מהגושים האלה:

  1. צנטריפוגה של השעיית התא שלך ב -5000 סל"ד למשך 2 דקות עם האצה (בשעה 4) ובולמים (ב -3) ומאפשרים לזרז את המולקולות הכבדות יותר. ואז לשאוב ~ 0.5 מ"ל מהחלק העליון של ההשעיה ולהעביר לבקבוק חדש. חזור על הפעולה במידת הצורך.
  2. השתמש ב- DNAse בריכוזים של 20-100 µg / ml (ריכוז שנבע משימוש אישי) כל עוד לא תתכוון לבצע ניסויים הקשורים ל- DNA.

אתה תמיד יכול לחזור ולקנות אמפולה טרייה מקו התאים שאתה רוצה גושים בחינם :)



שאלה ותשובה זו תורגמה אוטומטית מהשפה האנגלית.התוכן המקורי זמין ב- stackexchange, ואנו מודים לו על רישיון cc by-sa 3.0 עליו הוא מופץ.
Loading...